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氨基酸色谱仪是以强酸性阳离子交换树脂（磺酸基修饰聚苯乙烯－二乙烯基苯）为固定相，采用柱后茚三酮衍生的高效液相色谱仪。一、氨基酸在pH = 2.2时都带正电荷，在阳离子树脂上都被吸附，但由于酸碱性、极性和分子大小的差异，吸附强度各不相同。二、随着缓冲液的不断洗脱，氨基酸不断地吸附和解吸。三、不同的氨基酸和离子交换树脂的亲和力不同：碱性氨基酸＞芳香族氨基酸＞中性氨基酸＞酸性氨基酸和羟基氨基酸。四、提高流动相pH值，氨基酸正电荷减少，吸附力减弱，最后从离子交换柱上洗脱下来，洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨基酸和碱性氨基酸。五、氨基酸与茚三酮反应液在加热的条件下反应（135℃），生成可在570nm和440nm检测到的蓝紫色物质，仲氨酸生成可在440nm检测到的浅黄色物质。六、根据标准品的保留时间进行定性，根据峰面积进行定量。七、氨基酸总量的测定：1、常规酸解法：6N HCl，110℃，24h。可测定15种氨基酸，除含硫氨基酸和色氨酸外。2、含硫氨基酸氧化酸解法：水解前用过甲酸氧化，使胱、半胱氨酸生成磺基丙氨酸，蛋氨酸生成蛋氨酸砜，然后水解测定。HBr为终止剂，可测定除色氨酸、酪氨酸、组氨酸和苯丙氨酸外的蛋白水解氨基酸（14种）。偏重亚硫酸钠（Na2S2O5）为终止剂，可测定除色氨酸和酪氨酸外的蛋白水解氨基酸（16种）。3、碱解法：色氨酸，4mol/L NaOH，110℃，20h。 来源：http://www.fudizao.com |