聚丙烯酰胺胶电泳色谱仪的不连续体系

聚丙烯酰胺胶电泳色谱仪的电泳体系有连续体系和不连续体系，连续体系是在整个电泳体系中采用的缓冲液成分、pH和凝胶孔径都相同，不连续体系是在电泳体系中采用两种以上的缓冲液成分、pH和凝胶孔径。其中不连续体系的盘状凝胶电泳最为常用。

一、盘状凝胶电泳体系组成：

1、凝胶层：

（1）样品胶：T = 3.1%，C = 20%

（2）浓缩胶：T = 3.1%，C = 20%

（3）分离胶：T = 7.2%，C = 2.6%

2、缓冲液离子组成和pH：

（1）电极缓冲液：pH = 8.3的Tris－甘氨酸缓冲液（2）样品胶缓冲液：pH = 6.8的Tris－HCl缓冲液（3）浓缩胶缓冲液：pH = 6.8的Tris－HCl缓冲液（4）分离胶缓冲液：pH = 8.9的Tris－HCl缓冲液3、电位梯度：在电场中自然形成不连续的电位梯度。二、盘状凝胶电泳工作原理：在盘状凝胶电泳的不连续体系中，存在样品的浓缩效应、凝胶的分子筛效应和电荷效应，由于这三种物理效应，使样品分离效果好，分辨率高。1、浓缩效应：2、分子筛效应：离子界面到达浓缩胶与分离胶的界面处时，凝胶的pH变化明显，缓冲液中甘氨酸的解离迅速增加，有效迁移率超过蛋白质，随之高电位梯度消失，蛋白质在均一的电位梯度和pH条件下通过一定孔径的分离胶。当蛋白质的相对分子量和构象不同时，通过分离胶所受到的阻力不同，因迁移率不同而被分开。凝胶这种分离不同尺寸分子的特性是由于它的尺寸筛分能力，这种现象称为分子筛效应。3、电荷效应：蛋白质在浓缩胶与分离胶的界面处被高度浓缩，堆积成层，形成一狭小的高浓度的蛋白质区带，但由于每种蛋白质分子所载有效电荷不同，因而迁移率不同。承载有效电荷多的，移动速度快，反之则慢。因此各蛋白质以一定的顺序排列成多个圆盘状。综上所述，样品的浓缩效应是在浓缩胶中进行，分子筛效应和电荷效应主要是在分离胶中进行。在蛋白质进入分离胶时，由于在浓缩胶中的慢离子跑到蛋白质前面，高电位梯度消失，使蛋白质进入均一的电位梯度和pH的分离胶中。此时，又由于分离胶的孔径小，各蛋白质因分子大小和形状不同而被阻滞的程度不同，使一些即使是净电荷相同的蛋白质分子也因分子筛效应不同而得到分离。   来源：http://www.fudizao.com