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Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统，广泛应用于Western blotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相融合的由 8个亲水氨基酸（DYKDDDDK）组成的多肽片断。Flag标签只有8个氨基酸组成，因此它不会占据其他表位与结合域，避免导致融合蛋白的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点，Flag标签倾向于定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解 如何选择合适的Flag标签抗体？我们在选择Flag抗体时，主要根据自己的需要，特别是实验应用上的需要。另外，一个抗体检测后的应用类型越多，在使用过程中的选择余地就越大；而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。 另外，抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面，也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100μl Flag抗体（假如其WB检测的稀释比率是1:5000，最终使用液相当于500ml），要比效价低的1ml的Flag抗体（假如WB检测的稀释比率是 1:200，最终使用液相当于2ml）性价比更高。EarthOx的Flag标签抗体不仅能应用于细胞内定位的IF实验，同样还能应用于IP实验。1:200甚至更高的IP实验稀释比率，也说明了该抗体本身的具有很高的效价，同时，因为是单克隆抗体，因此特异性也很高。高效价所对应的高稀释比率也意味着高性价比。对于WB实验，其说明书的推荐起始稀释比例是1:1000，但在在1:10,000的稀释比率下也表现优异（EarthOx也进行了50,000次以后的稀释，仍然显示出很好的条带显示，没有在说明书里列出）。一个高效价的抗体不仅影响实验结果的灵敏度，还意味着更高的性价比。EarthOx的Flag标签抗体（货号#E022060）在常规的WB实验里， 推荐的起始稀释比率为1:1000，实际在EarthOx的应用中，还有1:10,000甚至更高的稀释比率，需要根据客户具体的实验条件进行进行优化。 |